Наша продукция

Набор реагентов «ГЭБ-ИФА-Тест» предназначен для ин витро определения человеческих натуральных антител (нАТ) к пептидному фрагменту белка S100β в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа (ИФА). Только для ин витро диагностики. 
 
Определение натуральных антител к белку S100β является чувствительным биомаркером повреждений мозга и нарушения функции гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) при черепно-мозговой травме и опухолях мозга различного генеза.
 
S100β представляет собой белок с молекулярным весом 20 kDa, входящий в суперсемейство S100/кальмодулин/тропонин, принадлежащий к семейству кальций связывающих белков. Изначально белок S100 был выделен из человеческого мозга и рассматривался в качестве специфичного мозгового антигена. В настоящее время охарактеризовано более 18 членов семейства белков S100. Эти белки обладают сходными структурными и функциональными характеристиками. 
 
• В ткани мозга S100 состоит преимущественно из гетеро- и монодимеров (A1) α- и (B) ß- субъединиц. 
α-и ß-субъединицы обладают высокой степенью структурной и межвидовой гомологии.
 
• S100BB димер (S100β-β) содержится в высокой концентрации в глиальных и швановских клетках, 
в то время как (S100α-β) экспрессируется только в глиальных клетках. 
 
• S100A1A1 (S100α-α) представлен в нейронах, но большей частью экспрессируется в экстра-нейрональных тканях.
 
При повреждении гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) и попадании белка S100β в кровь происходит накопление натуральных антител к нему. Уровень натуральных антител коррелирует с количеством высвободившегося белка S100β и степенью повреждения мозга и ГЭБ.

свернуть

Определение S100β натуральных антител основано на использовании твердофазного иммуноферментного анализа. На внутренней поверхности лунок иммобилизован модифицированный синтетический пептид - фрагмент человеческого глиального белка S100β (S100β15), нанесенный методом высокоаффинной сорбции. В лунках планшета, во время первой инкубации, натуральные антитела к пептидному фрагменту белка S100β из образца крови связываются с S100β15 пептидом. После промывки, связавшиеся антитела выявляют при помощи моноклональных мышиных антител к IgG человека (МКАТ), конъюгированных с пероксидазой хрена (ПХ). 
 
Во время инкубации с раствором субстрата тетраметилбензидина (ТМБ) происходит окрашивание растворов в лунках. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации S100β15 натуральных антител в исследуемом образце.Оптическую плотность измеряют при длине волны 450 нм.

свернуть

- Планшет 96-луночный стрипированный с иммобилизованным синтетическим S100b15 пептидом, герметично запечатанный - 1 шт.;
- Положительный контрольный образец (К+) - прозрачная, слегка опалесцирующая жидкость красного цвета - 1 флакон (1,0 мл);
- Отрицательный контрольный образец (К-) - прозрачная, слегка опалесцирующая жидкость зеленого цвета - 1 флакон (1,0 мл);
- «РК»: раствор конъюгата, моноклональные мышиные антитела к IgG человека, конъюгированные с пероксидазой хрена - 1 флакон (12 мл);
- «БРС»: буфер для разведения сывороток - 1 флакон (10 мл);
- «БИС»: буфер для инкубации сывороток - 1 флакон (10 мл);
- «ЦФБ»: цитрат-фосфатный буфер, прозрачная, бесцветная жидкость - 1 флакон (7 мл);
- «ТМБ»: 3,3’, 5,5’-тетраметилбензидин, прозрачная, слегка опалесцирующая жидкость - 1 флакон (7 мл);
- «Стоп-реагент»: 2N раствор соляной кислоты, прозрачная бесцветная жидкость - 1 флакон (12 мл);
- «ФСБ-Т»: 20-кратный концентрат фосфатно-солевого буфера с твином, прозрачная,   слегка опалесцирующая жидкость - 1 флакон (20 мл);
- Пленка для планшетов - прозрачная липкая полимерная пленка на белой бумажной подложке; готова к использованию - 1 шт.;
- Разборная емкость для рабочих растворов - 3 шт.;
- Аналитический паспорт;
- Инструкция по применению Набора.

свернуть

Результат качественного определения набором иммуноглобулинов класса G к пептидному антигену S100β15 должен соответствовать требованиям СПП (СПП S100β-09), включающей образцы сывороток, не содержащие IgG к пептидному антигену S100β15: специфичность по иммуноглобулинам класса G к пептидному антигену S100β15– 100%.

свернуть

Потенциальный риск применения Набора - класс 1 (ГОСТ Р 51609-2000). Все компоненты набора, за исключением стоп-реагента, в используемых концентрациях являются нетоксичными.Стоп-реагент действует на кожу и слизистые прижигающим образом, вызывая раздражение и ожоги, поэтому в случае попадания на кожные или слизистые покровы его следует немедленно тщательно смыть большим количеством проточной воды. 
 
При работе с набором и утилизации отходов следует соблюдать "Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР" (Москва, 1981 г.). 
 
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита и другие возбудители вирусных инфекций.

свернуть

- Фотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность раствора в лунках при длине волны 450 нм. Если используется двухволновой фотометр, установите референсный фильтр на 600-650 нм; 
- Дозаторы со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы жидкостив диапазоне 10-200 мкл; 
- Термостатируемый шейкер, поддерживающий температуру +37±0,1 °С; 
- Цилиндр мерный вместимостью 1 л; 
- Стеклянные или пластиковые пробирки для разведения образцов вместимостью не менее 3 мл; 
- Вода дистиллированная; 
- Вортекс; 
- Бумага фильтровальная.

свернуть

Отбор образцов крови из вены руки следует производить согласно стандартной процедуре, с соблюдением соответствующих мер предосторожности. Для проведения анализа не следует использовать гемолизированную и мутную сыворотку крови. Не допускается использование образцов с признаками микробной контаминации или с повышенным содержанием липидов.Храните все образцы при температуре (2-8 °C) сразу после отбора. S100β натуральные антитела стабильны в образцах крови до 3 часов при комнатной температуре (20-25 °C).
 
Для анализа можно использовать как свежеполученные образцы сыворотки крови, так и образцы, хранившиеся при температуре минус 20 °С не более 3-х месяцев.Не допускается повторное замораживание-оттаивание, приводящее к искажению результатов.После размораживания образцы следует тщательно перемешать.Перед проведением анализа следует убедиться, что образцы полностью прозрачны.Образцы, содержащие осадок, необходимо очищать центрифугированием при 5–10 тыс. об/мин в течение 10 минут.Перевозка образцов должна проводиться в емкостях со льдом при температуре 2-8 °C.

свернуть

1. Разморозить образцы сыворотки на льду или при температуре 2-8 °С. Все компоненты набора, включая стрипы, прогреть в течение 30 мин при комнатной температуре (20-25°С). 
 
2. Приготовить рабочий буфер (ФСБ-Т). Содержимое одного флакона «ФСБ-Т» перенести в мерный цилиндр и довести объем раствора до 400 мл дистиллированной водой. При наличии во флаконе с концентратом «ФСБ-Т» осадка солей, необходимо подогреть его при температуре (37±1) °С до полного растворения.Хранение: рабочий раствор «ФСБ-Т» хранят при температуре от +2 до +8 °С не более 1 месяца.
 
3. Предварительное разведение сывороток. Образцы исследуемых сывороток разводят 1:5 в «БРС». Для этого смешивают 20 мкл каждой сыворотки с 80 мкл «БРС».Разведенные образцы исследуемых сывороток хранению не подлежат. 
 
4. Установить в рамке планшета необходимое количество стрипов. Неиспользованные стрипы хранить только в герметично закрытом пакете при температуре 2-8°С 
не более месяца с момента использования. 
 
5. Тщательно перемешать содержимое пробирок, содержащих контроли. 
 
6. Приготовление рабочего раствора субстрата. Раствор субстрата готовят непосредственно перед использованием в отдельной чистой емкости. В расчете на 1 стрип 0,5 мл раствора из флакона «ЦФБ» смешать с 0,5 мл «ТМБ». Раствор тщательно перемешать. Хранение: не более 10 мин при температуре 20-25 °С в защищенном от света месте. 
 
7. Внести в соответствующие лунки в дубликатах по 100 мкл «БИС» (использовать как бланк) и каждой контрольной сыворотки.В остальные лунки внести в дубликатах по 10 мкл предварительно разведенных исследуемых сывороток (приготовленных согласно п. 7.3.) и по 90 мкл «БИС».Окончательное рабочее разведение сывороток 1:50.

Внесение образцов в лунки планшета необходимо произвести в течение 5-10 мин. 
 
8. После этого планшет закрыть защитной пленкой и инкубировать 30 мин при (37±1) °С на шейкере при скорости вращения платформы 500 об/мин или 1 час при температуре (37±1) °С в термостате. 
 
9. По окончании инкубации планшет промыть рабочим раствором «ФСБ-Т» пять раз следующим образом: 
• декантировать содержимое лунок в емкость с дезинфицирующим раствором; 
• в каждую лунку внести по 300 мкл промывочного буфера, перемешать в течение 10 секунд на шейкере; 
• декантировать содержимое лунок в емкость с дезинфицирующим раствором. 
При каждом декантировании тщательно удаляют остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со стрипами в перевернутом положении по фильтровальной бумаге. 
 
10. Инкубация с конъюгатом. После промывки и удаления влаги в каждую лунку внести «РК» объемом по 100 мкл. Планшет закрыть защитной пленкой и инкубировать 30 мин при (37±1) °С на шейкере при скорости вращения платформы 500 об/мин или 30 мин при температуре (37±1) °С в термостате. 
 
11. По окончании инкубации планшет промыть «ФСБ-Т» пять раз и удалить остатки влаги из планшета (см п.9). 
 
12. Внести в каждую лунку планшета раствор субстрата объемом по 100 мкл, приготовленного согласно п.6. Планшет инкубировать 10 мин при (37±1) °С на шейкере при скорости вращения платформы 500 об/мин или 10 мин при температуре (37±1) °С в термостате. 
 
13. Реакцию остановить внесением в каждую лунку 100 мкл содержимого флакона «Стоп-реагент». Перемешать содержимое лунок.

свернуть

Измерить величину оптической плотности (ОП) в лунках планшета на фотометре вертикального сканирования при длине волны 450 нм против лунок с «БИС». Референсный фильтр устанавливают на 620 нм.Измерение ОП растворов в лунках планшета необходимо произвести не позднее 15 мин. после внесения стоп-реагента. 
 
В случае невозможности своевременного измерения ОП растворов в лунках на фотометре, планшет допускается хранить при температуре 2-8 °С не более 4 ч.

свернуть

Определяют среднее арифметическое значение оптической плотности (ОП) раствора в лунках, содержащих контрольные образцы и анализируемые образцы.

1. Критерии достоверности анализа.
Результаты анализа считают достоверными при соблюдении следующих условий:
• в лунках с БИС среднее значение ОП (ОП БИС) не более 0,15;
• в лунках с (К-) среднее значение ОП (ОП Кср-) не более 0,5;
• в лунках с (К+) среднее значение ОП (OП К+) не менее 1,0.

В случае если полученные данные выходят за пределы указанных значений, результаты анализа считают недостоверными и анализ повторяют.

2. Интерпретация результатов ОПкрит рассчитывают по формуле:
ОПкрит = ОП(К-)ср + 0,2

Коэффициент серопозитивности (КС) сыворотки рассчитывают по формуле:
КС=ОП исследуемой сыворотки / ОПкрит

Интерпретацию результатов осуществляют в соответствии с таблицей:

Рекомендуется соотносить результаты серологического анализа с результатами мониторинга клинического состояния больного, данными других диагностических обследований и аппаратной диагностики. С клинической точки зрения наибольшую информативность имеет определение динамики уровня нАТ класса G к пептиду S100b15 с интервалом 2-7 дней при ЧМТ и 2-4 недели при подозрении на злокачественные новообразования ЦНС.

свернуть

Набор реагентов «ГЭБ-ИФА-Тест» должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре 2-8 °С в течение всего срока годности. Срок годности набора указан на коробке. Набор с истекшим сроком годности применению не подлежит. 

Транспортирование наборов должно производиться всеми видами крытых транспортных средств с соблюдением условий и требований, установленных на данном виде транспорта, при температуре 2-8 °С. Допустимо транспортирование при 9-20 °С не более 10 суток. Замораживание не допускается.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение Инструкции по применению Набора.

свернуть